Soutenue en novembre 2011
\nSous la direction de Bernard WALTER<\/p>\n
Dans cette \u00e9tude, nous avons dans un premier temps adapt\u00e9 le protocole d’embryogen\u00e8se somatique primaire \u00e0 diff\u00e9rentes vari\u00e9t\u00e9s d’hybrides porte-greffes (3309C, 110R, Fercal, 41B et SO4) en nous appuyant sur l’exp\u00e9rience acquise au laboratoire sur Vitis vinifera<\/em> cv Chardonnay. Les r\u00e9sultats montrent que le g\u00e9notype, le type d’explant (\u00e9tamine, fleur ou n\u0153ud), le type et la dose d’auxine utilis\u00e9s dans le milieu d\u2019induction (2,4-D ou 2,4,5-T) ont une influence sur les efficacit\u00e9s d’embryogen\u00e8se somatique. En effet, pour le 3309C, l’utilisation du 2,4,5-T dans le milieu d’induction a montr\u00e9 une efficacit\u00e9 embryog\u00e8ne sup\u00e9rieure \u00e0 partir de n\u0153uds par rapport \u00e0 celle obtenue \u00e0 partir d’\u00e9tamines. Cependant la meilleure efficacit\u00e9 a \u00e9t\u00e9 obtenue \u00e0 partir de fleurs de cette vari\u00e9t\u00e9, sur un milieu d’induction contenant du 2,4-D. De plus, le protocole d’embryogen\u00e8se somatique secondaire utilise de mani\u00e8re r\u00e9currente au laboratoire nous a permis d’obtenir des masses embryog\u00e8nes ainsi que des embryons somatiques secondaires de ces porte-greffes. Le protocole de conversion des embryons en plantes, en pr\u00e9sence de 4,5 uM de cytokinine (BAP) s’est av\u00e9r\u00e9 efficace pour le 11OR et le 41B. Dans un second temps, nous avons co-cultiv\u00e9 le mat\u00e9riel embryog\u00e8ne obtenu pour quatre de ces g\u00e9notypes (110R, 3309C, Fercal et 41B), avec Agrobacterium tumefaciens<\/em> contenant trois constructions g\u00e9n\u00e9tiques : (i) une copie d’une s\u00e9quence partielle (1020 pb) du g\u00e8ne de la coque prot\u00e9ique du virus en orientation sens ; (ii) une partie courte en sens et en anti-sens (280 pb) de cette m\u00eame s\u00e9quence formant une structure en \u00e9pingle \u00e0 cheveux (hpRNA = hairpin RNA) ; (iii) un amiRNA ciblant une s\u00e9quence virale. Le g\u00e8ne bact\u00e9rien codant la n\u00e9omycine phosphotransf\u00e9rase et conf\u00e9rant la r\u00e9sistance \u00e0 un antibiotique, la kanamycine, a \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9 comme g\u00e8ne de s\u00e9lection. Les conditions de s\u00e9lection \u00e0 la kanamycine ont n\u00e9cessit\u00e9 des adaptations exp\u00e9rimentales telles que l\u2019ajustement de la concentration en antibiotique puisque la s\u00e9lection avec 75 mg.L-1 de kanamycine s’av\u00e8re insuffisamment drastique dans la plupart de nos exp\u00e9riences de co-cullture. Les r\u00e9sultats d’analyse mol\u00e9culaire par PCR ont montr\u00e9 l’amplification probable des fragments d’int\u00e9r\u00eat (CPGFLV et amiRI1TA-71) dans des \u00e9chantillons de 11OR et de 41B r\u00e9sistants \u00e0 la kanamycine. Cependant des analyses mol\u00e9culaires suppl\u00e9mentaires par AL-PCR ne nous ont pas renseign\u00e9 sur une \u00e9ventuelle int\u00e9gration du transg\u00e8ne amiRATA-71 dans des masses embryog\u00e8nes de 41B.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" \u00c9tude de l’embryogen\u00e8se somatique et transformation g\u00e9n\u00e9tique de diff\u00e9rentes vari\u00e9t\u00e9s de porte-greffes de vigne en vue d’induire la r\u00e9sistance au Grapevine Fanleaf Virus Soutenue en novembre 2011 Sous la direction de Bernard WALTER Dans cette \u00e9tude, nous avons dans un premier temps adapt\u00e9 le protocole d’embryogen\u00e8se somatique primaire \u00e0 diff\u00e9rentes vari\u00e9t\u00e9s d’hybrides porte-greffes (3309C, 110R, […]<\/p>\n","protected":false},"author":2,"featured_media":0,"parent":1763,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"footnotes":""},"class_list":["post-86","page","type-page","status-publish","hentry"],"yoast_head":"\n