Soutenue en d\u00e9cembre 2011
\nSous la direction de Bernard WALTER et
\nCo-encadr\u00e9e par Paul SCHELLENBAUM et Pascale MAILLOT<\/p>\n
La vigne est une esp\u00e8ce p\u00e9renne sujette \u00e0 de nombreuses viroses, entra\u00eenant une baisse consid\u00e9rable de rendement et de qualit\u00e9 des fruits. Parmi ces viroses, la maladie du court-nou\u00e9 touche les vignobles du monde entier. Elle est majoritairement caus\u00e9e par le Grapevine fanleaf virus (GFLV). En vue de lutter contre cet agent pathog\u00e8ne, nous avons modifi\u00e9 des pr\u00e9curseurs naturels de microARNs afin d\u2019exprimer des microARNs artificiels (amiRNAs). Ceux-ci devraient induire l\u2019inhibition post-transcriptionnelle de l\u2019ARN du GFLV en recrutant la machinerie des microARNs naturels endog\u00e8nes et donc r\u00e9primer le d\u00e9veloppement du \u2028virus.<\/p>\n
La transformation g\u00e9n\u00e9tique de la vigne n\u00e9cessitant beaucoup de temps, nous utilisons un h\u00f4te artificiel herbac\u00e9 du GFLV\u00a0: Nicotiana benthamiana. Nous avons ainsi produit plusieurs lign\u00e9es transg\u00e9niques et avons test\u00e9 l\u2019expression des amiARNs. L\u2019inoculation de ces lign\u00e9es avec le GFLV-F13 n\u2019a abouti \u00e0 aucune r\u00e9sistance, et la recherche de m\u00e9canismes d\u2019interf\u00e9rence \u00e0 ARN est en cours. Parall\u00e8lement, des essais de transformation transitoire d\u2019embryons somatiques de \u2028V. vinifera cv. Chardonnay a permis l\u2019expression d\u2019amiRNAs et l\u2019inactivation post-transcriptionnelle de construction GUS-sensors, constitu\u00e9es du g\u00e8ne GUS fusionn\u00e9 avec la s\u00e9quence cibl\u00e9e par un amiRNA, d\u00e9montrant la fonctionnalit\u00e9 biologique de ces amiRNAs chez la vigne, et donc la faisabilit\u00e9 de cette technique.<\/p>\n
Jusqu\u2019ici, plusieurs strat\u00e9gies de r\u00e9sistance d\u00e9riv\u00e9e du pathog\u00e8ne ont \u00e9t\u00e9 test\u00e9es en vue de lutter contre cette maladie. Cependant, la technique des amiRNAs n\u2019a pas encore \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9e, et il s\u2019agirait donc du premier rapport concernant le d\u00e9veloppement d\u2019amiRNAs dirig\u00e9s contre le GFLV.<\/p>\n
Mots cl\u00e9s : virus, court-nou\u00e9, interf\u00e9rence \u00e0 ARN, transformation g\u00e9n\u00e9tique, Vitis vinifera, Nicotiana benthamiana<\/p>\n
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Development of artificial microRNAs targeting grapevine fanleaf virus.<\/strong><\/p>\n Among viral diseases affecting grapevine, the fanleaf degeneration disease, mainly caused by Grapevine fanleaf virus, occurs in vineyards worldwide. So far, several strategies based on \u201cpathogen- derived resistance\u201d have been used to control this disease. However, the artificial microRNA (amiRNA) technology has never been described in grapevine, and this manuscript is the first report demonstrating the interest of developing amiRNAs targeting GFLV and the feasibility of such a strategy. Keywords: virus, fanleaf degeneration, RNA silencing, genetic transformation, Vitis vinifera, Nicotiana benthamiana<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" D\u00e9veloppement de microARNs artificiels contre la maladie du court-nou\u00e9 de la vigne. Soutenue en d\u00e9cembre 2011 Sous la direction de Bernard WALTER et Co-encadr\u00e9e par Paul SCHELLENBAUM et Pascale MAILLOT La vigne est une esp\u00e8ce p\u00e9renne sujette \u00e0 de nombreuses viroses, entra\u00eenant une baisse consid\u00e9rable de rendement et de qualit\u00e9 des fruits. Parmi ces viroses, […]<\/p>\n","protected":false},"author":2,"featured_media":0,"parent":1763,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"footnotes":""},"class_list":["post-82","page","type-page","status-publish","hentry"],"yoast_head":"\n
\nWe modified an Arabidopsis natural microRNA precursor (ath-pre-miR319a) in order to express amiRNAs targeting GFLV sequences. We tested their ability to induce post-transcriptional silencing of viral RNA by recruiting the natural endogenous microRNA machinery and thus repress viral replication. Nicotiana benthamiana, an artificial herbaceous host of GFLV, was used as a model for transformation and virus inoculation. Several transgenic lines expressing these amiRNAs were produced. Up to now, their inoculation with GFLV did not allow us to detect resistance against the virus 14 days after inoculation, and evidence for an RNA silencing mechanism is currently under investigation. In parallel, transformation assays using somatic embryos of Vitis vinifera cv. Chardonnay allowed the transient expression of amiRNAs and silencing of GUS-sensor constructs, consisting of the GUS gene fused to the amiRNA target sequence, showing evidence for expression and biological functionality of these amiRNAs in grapevine.<\/p>\n